RIPA裂解液

产品简介：

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞、组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解后的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris-Hcl，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，

可以有效抑制蛋白降解。

包装内容：

保存条件： 4℃保存，一年有效

操作说明：

对于组织样品：

1.         组织块用冷PBS洗涤，去除血污。剪成小块置于匀浆器中。

2.         加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。

3.         将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

4.         12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

对于培养细胞样品：

1.       对于贴壁细胞：

a.用PBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。

b.加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

c.用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。

2.      对于悬浮细胞：

离心收集细胞，每6孔板细胞加约250 ul细胞总蛋白提取试剂（在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。

3.       冰浴30min，期间每10分钟用200ul移液器反复吹打数次，确保细胞完全裂解。

4.       12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白。

注意事项：

对于组织样品：

每50mg组织约加入1ml的本试剂裂解。对于软骨、皮肤等组织，可适当减少试剂用量，以提高蛋白浓度。

对于培养细胞样品：

1.       正常细胞密度下，每个6孔板细胞加入250ul左右裂解液。其它类推。

2.       裂解时可能会出现较粘稠状。可用移液器反复吹打，直至呈液状为止。如果一直较稠，可再加入适量裂解液。

3.       此试剂对人体有害，请适当防护。