BCA蛋白浓度测定试剂盒

产品简介：

本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前广泛应用的蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成。其操作简单，灵敏度高，所形成的颜色复合物稳定性佳，受干扰物质影响小。可检测浓度下限达25μg/ml的蛋白样品，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl。

包装内容：

保存条件：

BCA 试剂A 和BCA 试剂B 室温保存，蛋白标准液-20℃冻存。

操作说明：

1.  取1ml蛋白标准配置液加入到25mgBSA的蛋白标准管中，完全溶解蛋白标准品，即为25mg/ml的蛋白标准溶液。配制成的蛋白标准溶液可-20℃长期保存。

2. 取适量25mg/ml蛋白标准溶液，稀释至终浓度为0.5mg/ml。标准品最好与蛋白样品用同样的溶液稀释。但为了简便起见，通常使用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。

3.  做标准曲线。将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板中，不足20μl的加标准品稀释液补足到20μl。

4. 将待测的蛋白样品稀释至合适浓度，加到96孔板中，使待测样品总体积也为20μl。

5.  根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。

6.  每孔加入BCA工作液200μl，充分混匀（可将酶标板放在振荡器上振荡30s），37℃放置30min后，以标准曲线0号做参比，在 562nm波长下比色测定，记录各孔吸光度值。（注：也可以在室温放置2h，或60℃放置30min。如果蛋白浓度较低，最好放在60℃条件下反应。）

7.  以标准品蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μl），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。

注意事项：

   1. BCA法测定蛋白浓度受温度和时间的影响较大，吸光度值会随着时间的延长不断升高，且显色反应会因温度的升高而加快。如果不能精确控制显色反应的时间和温度，建议每次测定都需要做标准曲线。

2. 本试剂也适用与分光光度计测定，但需要根据测定的最小体积调整样品和BCA工作液的用量。

3. 为保证蛋白的精确定量，样品的提取和标准蛋白的配制最好选用相同的缓冲液，同时也要保证两者检测条件的一致性。如果缓冲液本身就有较高的背景值，建议使用其他的方法测定。

4. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但在样品含有脂类物质时将明显提高吸光度值。且受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇或β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA法时建议使用其他方法测定。