增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒

编号：JK-201                        

试剂组分：

产品特点：

u  增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒(Enhanced BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法改进研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。  

u  灵敏度高，检测浓度下限达到10μg/ml，最小检测蛋白量达到0.2μg，待测样品体积为1-25μl。

u  在20-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系

u  BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低10mM，无EGTA，    二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。

保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。本试剂盒自订购之日起一年内有效。

使用说明：

1.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。

2.将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20微升加到96孔板的标准品孔中，加用于稀释标准品的溶液补足到20微升。

3.加适当（<20微升）体积样品到96孔板的样品孔中，加用于稀释标准品的溶液到20微升。

4. 各孔加入200微升BCA工作液（试管法检测BCA工作液体为2毫升），37℃放置30分钟。

注：也可以室温放置1.5小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应 会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。

5. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。

6. 标准曲线的绘制。注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制得曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。

注意：实际操作时不必每次都做标准曲线，可以做一两个标准样品，和标准曲线比较得出浓度系数。未知样品的实际浓度=从标准曲线中得到的浓度*浓度系数。

 常见问题：

1. 是否每次测定时都需要做标准曲线？

  建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。 

2. 标准曲线的线性关系不好是什么原因？

注：如果样品较多，建议先将蛋白样品备加入孔板中，然后再加A+B混合液，这样就保证反应时间误差更小，因为做标准曲线需要反复调移液器和更换枪头花费不少的时间，造成各个孔反应的时间不一致标准曲线线性关系不好。

3. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。

  可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质，详细的BCA法的兼容性.

注意事项：

u  需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。需96孔板。如没有酶标仪，可使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。 

u  如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒或其他蛋白定量试剂盒。

u  为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。

u  EDTA浓度必须小于10mM，不兼容EGTA。不适用BCA法时，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒或其他蛋白定量试剂盒。

^_^ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。